miércoles, 16 de octubre de 2019

Alerta sanitaria sobre contaminación microbiana del reactivo 2 del kit para la identificación de CRP FS (proteína C reactiva)




Esta alerta fue emitida por el INVIMA el 19 de septiembre de 2019, y su fuente primaria es un reporte por parte de la empresa importadora Analisis Tecnicos LTDA, la cual es la titular del registro. La alerta consiste en  la contaminación microbiana del  reactivo 2 del kit para la identificación de PCR (proteína c reactiva) de los lotes 24753 Y 25005 del producto CRP FS (proteína c reactiva) con registro INVIMA 2019RD-0005561. Donde es posible obtener resultados erróneos en un rango de concentración por debajo de 20mg/L de PCR.(1)

CRP FS es un kit de reactivos comercializado y fabricado por la compañía Diasys Diagnostic Systems GMBH que sirve para determinar cuantitativamente la proteína C reactiva (PCR) en plasma o suero. La cuantificación de PCR sirve para la detección de infecciones agudas y para la monitorización de procesos inflamatorios, enfermedades reumáticas agudas y enfermedades gastrointestinales(2).

Mediante este kit se realiza un test inmunoturbidimétrico, el cual consiste en determinar una reacción antígeno-anticuerpo mediante medición espectrofotométrica de la absorbancia mediante un espectrofotómetro UV/VIS la cual indica que tan turbia está la muestra. Esta turbidez se genera debido a la reacción antígeno-anticuerpo, lo que significa que entre más turbia esté la muestra, habrá una mayor absorbancia y por lo tanto habrá una mayor concentración de complejos proteína-anticuerpo, lo que en este caso indica que habrá una mayor cantidad de PCR, ya que se mide la interacción de los anticuerpos anti PCR humana y la PCR de una muestra de suero o plasma humano(3).

Este kit consta de dos reactivos:

Reactivo 1: Buffer TRIS-HCl pH:7,5; 100mmol/L
Reactivo 2: Buffer TRIS-HCl pH: 8,0;100mmol/L y Anticuerpos (cabra) contra PCR humana ≤1%

Para realizar la prueba se requiere realizar un blanco, el cual sirve para determinar el punto 0 de absorbancia donde no hay proteína c reactiva, con 15μL de agua destilada y la preparación de 15μL de muestra con suero o plasma. Luego se adicionan a la muestra y al blanco 250μL de reactivo 1, para luego incubarlos a 37°C, posteriormente se lee la absorbancia con un haz de una longitud de onda de 340nm a 37°C y se registra como A1. Posteriormente se adicionan 50μL de reactivo 2 al blanco y a la muestra, ambas se incuban por 5min a 37°C y se lee la absorbancia con un haz de una longitud de onda de 340nm a 37°C y se registra como A2. Finalmente se realiza el cálculo de la diferencia de absorbancias (A2-A1) y para calcular la concentración se compara con una curva de calibración realizada con patrones que son comercializados por la misma empresa. Los cuales son sometidos al mismo proceso que la muestra y el blanco(2).

La contaminación microbiana en el reactivo 2 no implica una interferencia en la reacción entre la PCR y el anticuerpo ya que este es altamente selectivo por la PCR humana y muy difícilmente va a formar un complejo con otra proteína, debido a que este es un método de diagnóstico que emplea un anticuerpo monoclonal(4).  Aún así, la presencia de microorganismos ya sea en el reactivo 1 o en el reactivo 2 produciría errores en la medición debido a que los microorganismos alteran la turbidez de la muestra ya sea por su sola presencia o por la producción de metabolitos, lo que a su vez alteraría el valor de absorbancia tanto del blanco que sirve para determinar el punto 0 como de la muestra a analizar que sería en este caso el suero o el plasma del paciente. A pesar de que se alteran el blanco y la muestra, estos no se afectan de la misma manera, de modo que el blanco podría tener mayor o menor número de microorganismos que la muestra, ya que al momento de hacer la prueba debido a su metodología no se puede conocer la concentración exacta de contaminantes microbianos que ingresan tanto al blanco como a la muestra. Adicionalmente, al hacer la prueba en un pH entre 7,5 a 8 y a una temperatura de 37°C, además de una incubación previa por 5 minutos. se favorece el crecimiento microbiano y la producción de sus metabolitos  haciendo variar los resultados en cada medida de absorbancia debido a la variación de la turbidez(5).

Tabla 1. Productos disponibles en Colombia

Nombre del producto
Registro Sanitario
Estado del registro
CRP FS (proteína C reactiva)
INVIMA 2019RD-0005561

Vigente
CRP FS (proteína C reactiva)
INVIMA 2017RD-0004125

Suspendido

Fuente: INVIMA(6)

Se recomienda a los profesionales de la salud, analistas, e IPS de comprobar el número de lote si se va a utilizar este producto para una valoración de proteína c reactiva en plasma o en suero. Si se encuentra un producto con los números de lote reportados en la alerta reportarlo a la empresa Analisis Tecnicos LTDA, o en su defecto al INVIMA.

Se pueden hacer reportes a:
Analisis Tecnicos LTDA, línea (57) 1 2135900 o al correo: analtecltda@cable.net.co


Programa Nacional de Reactivovigilancia del INVIMA, línea 2948700 Ext: 3607, o al correo reactivovigilancia@invima.gov.co

Para más información sobre esta alerta siga este enlace:

https://app.invima.gov.co/alertas/ckfinder/userfiles/files/ALERTAS%20SANITARIAS/Dispositivos_Medicos/2019/Septiembre/Alerta%20No_%20%23136-2019%20-%20CRP%20FS%20(protei%CC%81na%20C%20reactiva)%20.pdf


REFERENCIAS

1.  INVIMA. Alerta sanitaria sobre: CRP FS (proteína C reactiva) [Internet]. Bogotá; 2019. p. 1–3. Available from: https://app.invima.gov.co/alertas/ckfinder/userfiles/files/ALERTAS SANITARIAS/Dispositivos_Medicos/2019/Septiembre/Alerta No_ %23136-2019 - CRP FS (proteína C reactiva) .pdf
2.  Diasys Diagnostic Systems GMBH. PCR FS [Internet]. 2019. p. 1–2. Available from: https://www.diasys-diagnostics.com/products/kit-lines/multi-purpose-kits/product-details/220-crp-fs/product.show
3.  Eckersall PD. Proteins, Proteomics, and the Dysproteinemias. In: Clinical Biochemistry of Domestic Animals (Sixth Edition) [Internet]. 6th ed. Elsevier; 2008. Available from: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123704917000052
4.  Siddiqui MZ. Monoclonal antibodies as diagnostics; An appraisal. Indian J Pharm Sci [Internet]. 2010 Jan;72(1):12–7. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2883214/
5. Dalgaard, P., Ross, T., Kamperman, L., Neumeyer, K., & McMeekin, T. A. (1994). Estimation of bacterial growth rates from turbidimetric and viable count data. International Journal of Food Microbiology, 23(3–4), 391–404. https://doi.org/10.1016/0168-1605(94)90165-1
6. INVIMA. Consulta datos de productos. 2019. Disponible en: http://consultaregistro.invima.gov.co:8082/Consultas/consultas/consreg_encabcum.jsp [Consultado el 25 de septiembre de 2019].

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